三重四极杆液质联用仪-使用ANYEEP TQ9100 液相色谱串联质谱系统测定变肾上腺素类物质和3-甲氧酪氨含量
一、方法原理
变肾上腺素类物质（甲氧基肾上腺素、甲氧基去甲肾上腺素）与 3 - 甲氧酪氨均为儿茶酚胺代谢产物，在血浆等生物样品中含量极低（pmol/L 级）且基质复杂。本方法基于固相萃取 - 液相色谱串联质谱技术实现精准检测：
- 净化富集：采用弱阳离子交换（WCX）固相萃取技术，特异性吸附碱性目标物，去除血浆中蛋白质、脂质等干扰基质；
- 分离检测：反相色谱柱分离后，经 ANYEEP TQ9100 的电喷雾离子源（ESI+）电离，以多反应监测（MRM）模式靶向捕获特征离子对，排除基质噪音干扰；
- 定量校正：采用同位素内标法（如 3 - 甲氧酪氨 - d4）校正基质效应与前处理损失，确保定量准确性。
二、仪器与试剂
（一）核心仪器
- 辅助设备：96 孔 WCX 固相萃取板、正压固相萃取装置、氮吹浓缩仪、高速冷冻离心机、移液器、EDTA 抗凝棕色采血管。
（二）关键试剂
- 色谱纯试剂：乙腈、甲醇、甲酸（质谱级，纯度≥99.9%）；
- 标准品：甲氧基肾上腺素、甲氧基去甲肾上腺素、3 - 甲氧酪氨（纯度≥98%）；
- 内标物：3 - 甲氧酪氨 - d4、甲氧基肾上腺素 - d3（纯度≥98%）；
- 其他：WCX 固相萃取柱（25mg / 孔）、超纯水（电阻率≥18.2MΩ・cm）、空白血浆（无目标物残留）。
三、实验步骤（以血浆样品为例）
1. 样品采集与保存
- 用 EDTA 抗凝管采集静脉血 4mL，立即置于冰浴中，1 小时内离心（4℃，3000r/min，10min）分离血浆；
- 血浆样品于 - 80℃冷冻保存，避免反复冻融（≤3 次）。
2. 样品前处理（固相萃取法）
- 取 500μL 血浆样品于 EP 管，加入 20μL 内标溶液（浓度 2000 pmol/L），涡旋混匀 30s（2500rpm）；
- 固相萃取活化：WCX 萃取板依次用 200μL 甲醇、200μL 超纯水活化，待液体自然流干；
- 上样与淋洗：加入样品液，正压（0.2MPa）推动上样，随后用 500μL 超纯水、500μL 乙腈依次淋洗，抽干 3min；
- 洗脱与复溶：用 100μL 乙腈（含 2% 甲酸）洗脱，收集洗脱液；40℃氮吹至近干，用 100μL 复溶液（50% 乙腈 + 0.1% 甲酸水溶液）复溶，过 0.22μm 滤膜待检。
3. 仪器条件设置
- 液相色谱：
- 质谱：
四、方法验证数据（契合临床检测要求）
- 线性关系
- 检出限与定量限
- 精密度
- 准确度
五、实际应用场景
- 临床诊断：血浆中变肾上腺素类物质与 3 - 甲氧酪氨检测，用于嗜铬细胞瘤等儿茶酚胺分泌肿瘤的筛查与诊断；
- 药物研发：监测药物干预后体内儿茶酚胺代谢水平变化，评估药效与安全性；
- 流行病学研究：大规模人群血浆样本筛查，分析代谢物水平与心血管疾病的关联。
