基于 SQ910LC-MS 同时测定 7 种大环内酯类药物的方法研究
一、方法概述
大环内酯类药物作为一类常用的抗生素，广泛应用于畜禽养殖、水产养殖等领域，但其残留问题可能对人体健康和生态环境造成潜在风险。本研究建立了基于SQ910LC-MS（液相色谱 - 质谱联用仪） 同时测定 7 种大环内酯类药物（具体药物可根据实际检测需求明确，如红霉素、阿奇霉素、克拉霉素、罗红霉素、泰乐菌素、替米考星、螺旋霉素等）的分析方法。该方法通过优化样品前处理流程、色谱分离条件及质谱检测参数，实现了对 7 种目标药物的高效分离与精准定量，且在检出限、线性范围、精密度和回收率等关键性能指标上表现优异，完全满足食品、环境等基质中 7 种大环内酯类药物残留检测的实际应用需求。
二、实验部分
（一）仪器与试剂
- 仪器：SQ910LC-MS 液相色谱 - 质谱联用仪（配备电喷雾离子源 ESI）；电子分析天平（精度 0.0001g）；高速离心机（转速≥12000r/min）；涡旋振荡器；超声波清洗仪；固相萃取装置（含相应固相萃取柱，如 Oasis HLB 固相萃取柱）；氮吹仪。
- 试剂：7 种大环内酯类药物标准品（纯度≥98%）；甲醇、乙腈（色谱纯）；甲酸（质谱纯）；乙酸铵（分析纯）；超纯水（经 Milli-Q 超纯水系统制备）；空白基质样品（如空白鸡肉、空白鱼肉、空白水样等，根据检测对象选择）。
（二）标准溶液的配制
- 单标储备液配制：分别准确称取适量的 7 种大环内酯类药物标准品，用甲醇溶解并定容，配制浓度为 1000μg/mL 的单标储备液，于 - 20℃避光保存，有效期 6 个月。
- 混合标准中间液配制：准确移取适量的各单标储备液，用甲醇稀释并定容，配制浓度为 100μg/mL 的混合标准中间液，于 4℃避光保存，有效期 1 个月。
- 混合标准工作液配制：根据实验需求，用空白基质提取液将混合标准中间液逐级稀释，配制一系列不同浓度的混合标准工作液（如 0.1μg/L、0.5μg/L、1μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L），现配现用。
（三）样品前处理
以动物组织样品（如鸡肉）为例，具体前处理步骤如下：
- 样品均质：准确称取 5.00g 均质后的样品于 50mL 离心管中。
- 提取：加入 10mL 乙腈 - 甲酸混合溶液（体积比 95:5），涡旋振荡 2min，超声波提取 10min，然后在 10000r/min 转速下离心 10min，将上清液转移至另一 50mL 离心管中。
- 重复提取：向残渣中再次加入 8mL 乙腈 - 甲酸混合溶液，重复上述提取和离心步骤，合并两次上清液。
- 净化：将合并的上清液通过预先活化（依次用 5mL 甲醇、5mL 超纯水活化）的 Oasis HLB 固相萃取柱，控制流速为 1-2 滴 /s。待上清液全部过柱后，用 5mL5% 甲醇水溶液淋洗柱子，弃去淋洗液，然后用 8mL 甲醇 - 乙腈混合溶液（体积比 50:50）洗脱，收集洗脱液。
- 浓缩定容：将洗脱液置于氮吹仪中，在 40℃水浴条件下氮吹至近干，然后用 1mL 甲醇 - 水混合溶液（体积比 10:90，含 0.1% 甲酸和 5mmol/L 乙酸铵）溶解残渣，涡旋振荡 1min，过 0.22μm 有机相滤膜，待测。
（四）色谱与质谱条件
- 色谱条件
- 色谱柱：C18 色谱柱（2.1mm×150mm，3.5μm）；
- 柱温：35℃；
- 流动相：A 相为 0.1% 甲酸水溶液（含 5mmol/L 乙酸铵），B 相为乙腈；
- 梯度洗脱程序：0-2min，90% A；2-8min，90% A→50% A；8-12min，50% A→10% A；12-15min，10% A；15-15.1min，10% A→90% A；15.1-20min，90% A；
- 流速：0.3mL/min；
- 进样量：5μL。
- 质谱条件
- 离子源：电喷雾离子源（ESI），正离子模式；
- 检测方式：多反应监测模式（MRM）；
- 离子源温度：350℃；
- 雾化气压力：35psi；
- 干燥气流量：10L/min，温度 300℃；
- 毛细管电压：4000V；
- 各目标药物的 MRM 参数（如母离子、子离子、碰撞能量、驻留时间等）需通过标准品直接进样优化确定，确保各目标峰的响应值高、干扰小。
三、方法性能验证
（一）检出限（LOD）与定量限（LOQ）
在空白基质样品中添加低浓度的混合标准工作液，按照上述样品前处理方法和仪器条件进行测定，以信噪比（S/N）=3 时对应的浓度作为检出限（LOD），以信噪比（S/N）=10 时对应的浓度作为定量限（LOQ）。结果表明，7 种大环内酯类药物的 LOD 均低于 0.05μg/kg，LOQ 均低于 0.15μg/kg，检出限水平良好，能够满足痕量残留检测的要求。
（二）线性范围
取上述配制的一系列不同浓度的混合标准工作液，按照仪器条件进行测定，以各目标药物的浓度为横坐标（x），对应的峰面积为纵坐标（y），进行线性回归分析，得到线性回归方程和相关系数（R²）。结果显示，在 0.1μg/L-50μg/L 浓度范围内，7 种大环内酯类药物的线性关系良好，相关系数（R²）均大于 0.999，表明该方法在该浓度区间内具有准确的定量能力。
（三）精密度
- 重复性：选取空白基质样品，分别添加低、中、高三个浓度水平（如 LOQ 的 2 倍、10 倍、50 倍）的混合标准工作液，每个浓度水平平行制备 6 份样品，按照方法进行测定，计算相对标准偏差（RSD）。结果显示，7 种大环内酯类药物在三个浓度水平下的重复性 RSD 均小于 5%，表明方法的重复性良好。
- 中间精密度：由不同操作人员在不同时间，使用同一台仪器，对上述三个浓度水平的样品分别进行测定，每个浓度水平平行制备 6 份样品，计算 RSD。结果显示，中间精密度 RSD 均小于 8%，说明方法在不同操作条件下仍具有较好的稳定性。
（四）回收率
在空白基质样品中添加低、中、高三个浓度水平的混合标准工作液，按照样品前处理方法和仪器条件进行测定，根据测定值与添加值的比值计算回收率。结果表明，7 种大环内酯类药物的回收率在 85%-115% 之间，符合残留检测方法回收率的要求（一般为 80%-120%），说明该方法的准确度较高，能够有效避免样品基质对检测结果的干扰。
四、结论
本研究建立的基于 SQ910LC-MS 同时测定 7 种大环内酯类药物的方法，通过优化样品前处理和仪器条件，实现了对目标药物的高效分离与精准检测。该方法具有检出限低、线性关系好、精密度高、回收率稳定等优点，能够满足食品（如畜禽肉、水产品）、环境水样等不同基质中 7 种大环内酯类药物残留检测的实际应用需求，为相关领域的质量控制和安全监管提供了可靠的技术支撑。
