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三重四极杆液相色谱质谱联用仪-使用Anyeep TQ9100测定人血清中睾酮、雄烯二酮等激素的含量


本文利用安益谱公司 Anyeep TQ9100超高效液相色谱串联质谱系统,建立了一种同时检测人血清中4种甾体激素含量的方法。该方法线性良好,定量限满足相关标准要求。利用本方法和设备可实现对甾体激素的检测和定量。

三重四极杆液相色谱质谱联用仪-使用Anyeep TQ9100测定人血清中睾酮、雄烯二酮等激素的含量(图1)

安益谱TQ9100三重四极杆液相色谱质谱联用仪

囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS),是由遗传和环境因素共同导致的一种常见的内分泌代谢性疾病,其主要的临床表现为月经不调、不孕、高雄激素血症、卵巢多囊,可伴有肥胖、胰岛素抵抗、血脂紊乱等代谢异常,并可导致2型糖尿病、心脑血管疾病和子宫内膜癌发病风险增高。目前,PCOS 病理生理的核心问题是高雄激素血症,已成为学科领域内专家的共识。

2023年发布的《多囊卵巢综合征雄性激素质谱检测专家共识》建议使用 LC-MS/MS 同时测定患者体内血清总睾酮和雄烯二酮含量,再通过计算得到游离睾酮指数 FAI,可以有效预测 PCOS 患者代谢风险,提高对高雄激素血症的筛查效率。因此本方法利用 Anyeep TQ9100液相色谱串联质谱系统检测人血清中的睾酮、雄烯二酮等雄激素以及孕酮和17α-羟孕酮等孕激素。

仪器与试剂

Anyeep TQ9100超高效液相色谱串联质谱系统

乙腈(质谱纯,美国 Thermo Fisher 公司)

水(超纯水)

甲酸(德国默克公司)

96孔 WCX 固相萃取板(北京曼哈格)

液相条件

流动相A:0.2 mM 氟化铵,水

流动相B:0.2 mM 氟化铵,甲醇

色谱柱:Waters BEH C18 2.1mm × 50mm 1.7μm

柱温:40 ℃

流速:0.4 mL/min

进样量:5 μL

质谱条件

离子化源: 电喷雾离子化源(ESI+)

源温度: 500 ℃

喷雾电压: 5000 V

气帘气: 20 psi

雾化气: 50 psi

辅助气: 50 psi

碰撞气: 8

扫描模式: MRM

三重四极杆液相色谱质谱联用仪-使用Anyeep TQ9100测定人血清中睾酮、雄烯二酮等激素的含量(图2)

三重四极杆液相色谱质谱联用仪-使用Anyeep TQ9100测定人血清中睾酮、雄烯二酮等激素的含量(图3)

样本处理

取待测样本200 μL于1.5 mL EP 管中,加入内标溶液20μL,再加入甲基叔丁基醚980 μL;涡旋混匀(2500 rpm,10 min)并离心(4 ℃,14000 rpm,10 min);取上清液800 μL于96孔板中,45℃氮吹至干;在吹干的96孔板中加入160 μL复溶液(50%甲醇),置于微孔板震荡仪上2000 rpm/min 震摇2 min,4000 rpm 离心5 min,5 μL进样。

三重四极杆液相色谱质谱联用仪-使用Anyeep TQ9100测定人血清中睾酮、雄烯二酮等激素的含量(图4)

图谱

三重四极杆液相色谱质谱联用仪-使用Anyeep TQ9100测定人血清中睾酮、雄烯二酮等激素的含量(图5)

三重四极杆液相色谱质谱联用仪-使用Anyeep TQ9100测定人血清中睾酮、雄烯二酮等激素的含量(图6)

总结

本方法使用安益谱全自主研发生产的 TQ 9100三重四极杆串联质谱系统,可同时检测血清中睾酮、雄烯二酮、孕酮和17α-羟孕酮的含量,该方法线性好、准确度高,前处理简单,单个样本分析时间为5.5分钟,通量较高,适合临床使用。