三重四极杆液质联用仪-使用ANYEEP TQ9100 液相色谱串联质谱系统测定人血清中睾酮
一、方法设计：仪器特性与临床需求的适配逻辑
- 目标物与检测痛点
睾酮（C₁₉H₂₈O₂，m/z 288.2）作为关键性激素，血清中浓度差异极大（成年男性 14～25.4nmol/L，女性 1.3～2.8nmol/L），且受蛋白质、甾体激素同源物（如雄烯二酮）干扰严重。TQ9100 凭借串联金属四极杆 + 180° 碰撞反应池设计，可突破基质干扰与痕量检测瓶颈，契合临床对高雄激素血症的精准诊断需求。
二、实验流程：从血清处理到检测的全步骤
（一）样品前处理（液液萃取法）
- 提取净化：取 200μL 血清于 1.5mL EP 管，加入 20μL 内标液（睾酮 - d3，终浓度 2nmol/L），涡旋 30s；加入 980μL 甲基叔丁基醚，2500rpm 涡旋 10min，4℃、14000rpm 离心 10min。
- 浓缩复溶：取 800μL 上清液至 96 孔板，45℃氮吹至干；加入 160μL 50% 甲醇复溶液，2000rpm 震摇 2min，4000rpm 离心 5min，取 5μL 进样。
三、方法验证：临床检测的可靠性保障
- 线性与检出限
睾酮在 0.1～50nmol/L 范围内线性良好（R²≥0.998），方法检出限（LOD，S/N=3）0.03nmol/L，定量限（LOQ，S/N=10）0.1nmol/L，远低于女性血清最低参考值（1.3nmol/L）。
- 精密度与准确度
低、中、高 3 个浓度（0.5、15、40nmol/L）加标回收实验中，回收率 92.6%～105.3%，日内精密度 RSD≤3.2%，日间精密度 RSD≤4.8%（n=6），符合 CLIA'88 临床实验室标准。
- 基质效应控制
采用基质匹配标准曲线校正，结合 TQ9100 碰撞反应池的干扰去除能力，基质效应误差控制在 ±8% 以内，避免蛋白质降解产物导致的检测偏差。
四、临床实战要点：精准检测的优化策略
- 样品稳定性控制
血清样品采集后需立即离心分离（3000rpm，10min），2～8℃可保存 48h，-20℃冷冻可保存 3 个月，避免室温放置导致睾酮降解（24h 降解率＞15%）。
- 仪器维护技巧
每检测 50 个样本后，用 50% 甲醇冲洗色谱柱 10min；离子源每两周拆解清洁，通过 ANYEEP Chemstation 一键调谐功能（以全氟三丁胺为校准物）确保质量轴稳定性（24h 误差≤0.02u）。
- 干扰排除方案
针对雄烯二酮（m/z 287.2）等同源干扰物，通过设置特异性 MRM 通道（睾酮定量离子 97.0 vs 雄烯二酮定量离子 97.0 的碰撞能量差异 10eV）实现基线分离。
- 临床数据处理
启用软件内置的 “临床参考范围标注” 功能，自动匹配不同性别 / 年龄段参考值（如男性 14～25.4nmol/L），生成带预警标识的检测报告，辅助 PCOS 等疾病诊断。
