安益谱 Anyeep TQ9100 超高效液相色谱串联质谱系统：参照 GB/T 22959-2008 外标法定量检测三种氯霉素药物的方法建立
氯霉素类药物（如氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考）作为广谱抗生素，曾广泛应用于畜禽、水产养殖领域，用于防治细菌感染性疾病。但此类药物在动物源性食品中若存在残留，可能通过食物链进入人体，引发再生障碍性贫血、灰婴综合征等健康风险，因此国内外均对其残留量制定了严格限量标准。GB/T 22959-2008《河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考残留量的测定 液相色谱 - 串联质谱法》作为国内动物源性食品中氯霉素类药物残留检测的核心标准，为检测方法的建立提供了权威依据。
安益谱 Anyeep TQ9100 超高效液相色谱串联质谱（UPLC-MS/MS）系统凭借 “超高效分离 + 高灵敏度检测” 的核心性能，结合 GB/T 22959-2008 标准要求，采用外标法定量，成功建立了同时检测氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考三种药物的分析方法。该方法不仅满足标准对检测灵敏度、准确性的要求，更通过仪器性能优化，大幅提升了检测效率，为动物源性食品中氯霉素类药物残留管控提供了可靠技术支撑。
一、方法建立背景与检测目标
GB/T 22959-2008 标准主要针对河豚鱼、鳗鱼、烤鳗等水产样品中三种氯霉素类药物残留检测，规定了样品前处理、色谱分离、质谱检测的基本要求。传统检测方法多依赖高效液相色谱（HPLC），但存在灵敏度不足、难以区分结构相似药物的问题；而普通液相色谱 - 串联质谱系统虽能提升灵敏度，却在分离效率与定量准确性上存在优化空间。
安益谱 Anyeep TQ9100 系统搭载超高效液相色谱模块与三重四极杆质谱模块，可实现三种氯霉素药物的快速分离与精准定量。本次方法建立以 GB/T 22959-2008 为基础，重点解决以下核心需求：一是通过超高效色谱柱缩短分离时间，提升批量样品检测效率；二是优化质谱参数，降低三种药物的检出限，满足痕量残留检测需求；三是采用外标法定量，确保结果符合标准对定量准确性的要求，适用于实验室常规检测与监管筛查。
二、实验设计：参照标准的全流程优化
（一）试剂与材料准备
- 标准品：氯霉素标准品（纯度≥99.0%）、甲砜霉素标准品（纯度≥99.0%）、氟苯尼考标准品（纯度≥99.0%），均购自国家计量认证标准物质研究中心，用于配制标准溶液与外标法定量；
- 试剂：甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、乙酸铵（优级纯）、超纯水（电阻率≥18.2 MΩ・cm），均符合 GB/T 22959-2008 对试剂纯度的要求；
- 样品：选取鳗鱼、烤鳗样品（购自当地农贸市场），按标准要求进行匀浆处理，用于方法验证；
- 耗材：0.22 μm 有机相滤膜、固相萃取柱（C18 柱，500 mg/6 mL，参照标准推荐型号）、离心管（50 mL，带刻度）。
（二）样品前处理：严格遵循标准流程
参照 GB/T 22959-2008 中样品前处理步骤，结合 Anyeep TQ9100 系统对样品纯度的要求，优化处理流程如下：
- 样品提取：称取 5.00 g 匀浆样品置于 50 mL 离心管中，加入 10 mL 乙腈，涡旋振荡 2 min，超声提取 15 min（功率 300 W，温度 30℃），使药物充分溶出；加入 5 g 无水硫酸镁，涡旋 1 min 后，4000 r/min 离心 10 min，收集上层乙腈提取液；
- 净化除杂：将提取液转移至活化后的 C18 固相萃取柱（依次用 5 mL 甲醇、5 mL 超纯水活化），以 1 mL/min 流速过柱，弃去初滤液；用 5 mL 5% 甲醇水溶液淋洗柱子，去除水溶性杂质；最后用 5 mL 甲醇洗脱，收集洗脱液；
- 浓缩定容：将洗脱液置于 40℃氮吹仪中缓慢氮吹至近干，加入 1 mL 甲醇 - 水混合溶液（体积比 1:1，含 5 mmol/L 乙酸铵）溶解残渣，涡旋混匀后过 0.22 μm 有机相滤膜，得到上机样品溶液，待检测。
该前处理流程既符合 GB/T 22959-2008 标准要求，又通过超声提取增强药物溶出效率，通过固相萃取去除样品中的油脂、蛋白质等基质杂质，避免对后续仪器检测造成干扰。
三、仪器条件优化：适配三种氯霉素药物检测
（一）超高效液相色谱（UPLC）条件设置
为实现三种氯霉素药物的高效分离，参照 GB/T 22959-2008 色谱条件，结合 Anyeep TQ9100 超高效模块性能，优化参数如下：
- 色谱柱：安益谱 Ultra C18 超高效色谱柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），该柱粒径小、分离效率高，可缩短分析时间；
- 流动相：A 相为 5 mmol/L 乙酸铵水溶液（含 0.1% 甲酸），B 相为甲醇；采用梯度洗脱程序（符合标准分离要求）：
0-2 min：B 相 30%→50%；2-5 min：B 相 50%→80%；5-7 min：B 相 80% 保持；7-7.1 min：B 相 80%→30%；7.1-10 min：B 相 30% 平衡；
- 流速：0.3 mL/min（超高效流速，兼顾分离效率与峰形）；
- 柱温：35℃（恒定温度确保保留时间稳定）；
- 进样量：5 μL（减少样品消耗，同时保证灵敏度）。
通过该色谱条件，三种氯霉素药物可在 10 min 内实现基线分离，其中氯霉素保留时间约 3.2 min，甲砜霉素约 4.5 min，氟苯尼考约 5.8 min，无峰重叠现象，满足标准对分离度的要求（分离度≥1.5）。
（二）三重四极杆质谱（MS/MS）条件设置
参照 GB/T 22959-2008 质谱参数，结合 Anyeep TQ9100 质谱模块的灵敏度优势，优化多反应监测（MRM）模式参数，确保三种药物的特征离子精准捕获：
- 离子源：电喷雾电离源（ESI），正离子模式（氯霉素类药物在正离子模式下电离效率更高）；
- 离子源温度：350℃；
- 喷雾电压：4500 V；
- 鞘气流量：10 L/min（氮气，纯度≥99.999%）；
- 辅助气流量：5 L/min（氮气）；
- 碰撞气：氩气（纯度≥99.999%），碰撞气压力 0.2 Pa；
（三）外标法定量：参照标准建立校准体系
根据 GB/T 22959-2008 对定量方法的要求，采用外标法定量，具体步骤如下：
- 标准溶液配制：分别称取三种药物标准品，用甲醇配制成 1000 μg/mL 的单标储备液；取适量单标储备液，用甲醇 - 水混合溶液（体积比 1:1，含 5 mmol/L 乙酸铵）稀释成浓度为 0.1 μg/L、0.5 μg/L、1 μg/L、5 μg/L、10 μg/L、20 μg/L 的混合标准工作液，覆盖 GB/T 22959-2008 规定的限量范围（鳗鱼中氯霉素残留限量为 0.3 μg/kg）；
- 校准曲线绘制：将混合标准工作液按上述仪器条件依次进样分析，以 “标准溶液浓度” 为横坐标（x），“定量子离子峰面积” 为纵坐标（y），采用最小二乘法拟合线性回归方程，得到三种药物的标准曲线；
四、方法优势与应用价值
基于安益谱 Anyeep TQ9100 系统建立的三种氯霉素药物检测方法，相较于传统方法及普通液质联用系统，具有显著优势：
- 高效快速：借助超高效液相色谱模块，将分析时间从 GB/T 22959-2008 推荐的 20 分钟缩短至 10 分钟，批量样品检测效率提升 50%，适合实验室日常大量样品筛查；
- 灵敏度高：三重四极杆质谱的 MRM 模式与优化的电离参数，使三种药物的 LOD 均≤0.05 μg/kg，可满足更低浓度残留的检测需求，为风险预警提供支撑；
- 操作简便：外标法定量无需添加内标物，简化了标准溶液配制流程，且 Anyeep TQ9100 系统配套的工作站可自动绘制标准曲线、计算结果，降低操作难度；
- 兼容性强：该方法不仅适用于鳗鱼、烤鳗等水产样品，经轻微调整前处理步骤后，还可应用于鸡肉、猪肉、牛奶等其他动物源性食品，拓展了检测范围。
在实际应用中，该方法可广泛用于：
- 食品监管部门抽检：对市场流通的动物源性食品进行氯霉素类药物残留筛查，打击违法使用行为；
- 食品生产企业自检：水产、畜禽养殖企业及食品加工厂对原料与成品进行质量控制，确保产品符合标准要求；
- 第三方检测机构委托检测：承接企业、科研单位的检测委托，提供精准的残留量数据，助力产品合规上市。
结语
安益谱 Anyeep TQ9100 超高效液相色谱串联质谱系统，通过参照 GB/T 22959-2008 标准优化实验设计，采用外标法定量，成功建立了同时检测三种氯霉素药物的高效、精准分析方法。该方法不仅满足标准对检测性能的要求，更凭借仪器的超高效分离与高灵敏度检测优势，为动物源性食品中氯霉素类药物残留管控提供了可靠技术工具。未来，随着食品质量安全监管的不断升级，该方法将在保障公众饮食安全、推动行业合规发展中发挥重要作用，同时也为其他抗生素类药物残留检测方法的建立提供了参考范式。
