安益谱TQ9100液相色谱串联质谱系统测定人血清中睾酮、雄烯二酮等激素含量

技术博客 | 2025-08-06 | 阅读

引言

多囊卵巢综合征（Polycystic ovary syndrome，PCOS），是由遗传和环境因素共同导致的一种常见的内分泌代谢性疾病，高发年龄为20～35岁，育龄女性PCOS患病率为5%～10%。其主要的临床表现为月经不调、不孕、高雄激素血症、卵巢多囊，可伴有肥胖、胰岛素抵抗、血脂紊乱等代谢异常，并可导致2型糖尿病、心脑血管疾病和子宫内膜癌发病风险增高。目前，PCOS病理生理的核心问题是高雄激素血症已成为学科领域内专家的共识。高雄激素血症指女性体内雄激素水平升高或功能过强，一般通过临床表现或生化检测来评估雄激素的升高程度。高雄激素的临床表现主要为多毛、痤疮、脱发和男性化体征；生化检测指标主要为总睾酮（total testosterone，TT）、游离睾酮（free testosterone，FT）、脱氢表雄酮（dehydroepiandrosterone，DHEA）、硫酸脱氢表雄酮（dehydroepiandrosterone sulfate，DHEA-S）、4-雄烯二酮（4-androstenedione，A4）。2018年发布的《多囊卵巢综合征中国诊疗指南》建议：对于育龄期、围绝经期、青春期女性，应先进行高雄激素血症评估，并逐一排除其他可能引起高雄激素和排卵障碍的疾病，才能明确PCOS诊断。

检测患者体内总睾酮水平是临床评估女性雄激素升高的首要方法，血清游离睾酮水平升高则是诊断高雄激素血症的最佳指标。2023年发布的《多囊卵巢综合征雄性激素质谱检测专家共识》建议使用LC-MS/MS同时测定患者体内血清总睾酮和雄烯二酮含量，再通过计算得到游离睾酮指数FAI，可以有效预测PCOS患者代谢风险，提高对高雄激素血症的筛查效率。因此本方法利用ANYEEP TQ9100液相色谱串联质谱系统检测人血清中的睾酮、雄烯二酮等雄激素以及孕酮和17α-羟孕酮等孕激素。

实验部分

样品处理：取待测样本200μL于1.5mL EP管中，加入内标溶液20μL，再加入甲基叔丁基醚980μL；涡旋混匀（2500rpm，10min）并离心（4℃，14000rpm，10min）；取上清液800μL于96孔板中，45℃氮吹至干；在吹干的96孔板中加入160μL复溶液（50%甲醇），置于微孔板震荡仪上2000rpm/min震摇2min，4000rpm离心5min，5μL进样。

色谱条件：色谱柱使用Waters BEH C18 2.1mm × 50mm 1.7μm进行液相分离，流动相A为水（含0.2mM氟化铵），流动相B为甲醇（含0.2mM氟化铵），柱温40℃，梯度设置见表1。

质谱条件：采用电喷雾离子化源正离子模式（ESI+）和多反应监测模式（MRM）进行质谱扫描。离子化源温度500℃，喷雾电压5000V，气帘气20psi，雾化气为50psi，辅助加热气为50psi，碰撞气8，EP 7.5V，CXP 0V。各化合物离子对参数见表2。

表1 梯度洗脱条件

时间	流速	A相	B相
min	mL/min	%	%
0	0.4	85	15
1.0	0.4	40	60
3.0	0.4	5	95
4.0	0.4	5	95
4.1	0.4	85	15
5.5	0.4	85	15

表2 待测物及内标MRM离子对参数

待测物名称	Q1离子	Q3离子	驻留时间 ms	CE (V)	DP (V)
雄烯二酮*	287.2	97.0	25	12	100
雄烯二酮	287.2	109.0	25	15	100
睾酮*	289.2	97.0	25	12	100
睾酮	289.2	109.0	25	15	100
17α-羟孕酮*	331.2	97.0	25	12	100
17α-羟孕酮	331.2	109.0	25	15	100
黄体酮*	315.2	97.0	25	12	100
黄体酮	315.2	109.0	25	15	100
雄烯二酮-d7*	361	100.0	25	12	100
雄烯二酮-d7	294.2	331.2	25	15	100
睾酮-d3*	294.2	97.0	25	16	100
睾酮-d3	292.2	113.0	25	12	100
17α-羟孕酮-d8*	292.2	100.0	25	12	100
17α-羟孕酮-d8	339.2	109.0	25	16	100
黄体酮-d9*	339.2	100.0	25	12	100
黄体酮-d9	324.1	109.0	25	16	100