儿茶酚胺（Catecholamine, CA）是人体重要的神经递质和激素。其在嗜铬细胞内的儿茶酚-O-甲基转移酶（Catechol-O-methyltransferase, COMT）的催化作用下代谢成变肾上腺素类物质（Metanephrines, MNs），包含甲氧基肾上腺素（Metanephrine, MN）和甲氧基去甲肾上腺素（Normetanephrines, NMN）。由于MNs较CA的半衰期长，性质稳定且能直接反映嗜铬细胞的状态，因此临床上通过检测血液中MNs的含量来辅助诊断嗜铬细胞瘤和副神经节瘤，是《嗜铬细胞瘤和副神经节瘤诊断治疗专家共识（2020版）》《中国继发性高血压临床筛查多学科专家共识（2023）》等专家共识推荐的首选标志物。

目前MNs分析方法主要包括HPLC法和免疫法，前者灵敏度较低，后者特异性较差。本方法采用ANYEEP TQ9100液相色谱串联质谱系统，同时检测人血浆中甲氧基肾上腺素、甲氧基去甲肾上腺素和3-甲氧酪胺（3-Methoxytyramine, 3-MT）。

 

安益谱TQ9100三重四极杆液质联用仪

实验部分

样品处理：取待测样本500μL于1.5mL EP管中，加入内标溶液20μL，涡旋混匀（2500 rpm，30s）。使用WCX填料的96孔固相萃取板，先用200μL水活化，待水流干后，加入上述样本，通过正压萃取装置进行固相萃取。待样本流干后先后加入500μL水和500μL乙腈淋洗样本。待淋洗液流干后，加100μL乙腈（含2%FA）洗脱样本。洗脱液25℃氮气吹干10min，用100μL复溶液（50%乙腈，含0.1%甲酸）复溶。20μL进样。

色谱条件：色谱柱使用Phenomenex Kinetex F5 Column 3.0mm×100mm 2.6μm进行液相分离，流动相A为水（含0.1%甲酸），流动相B为乙腈，柱温40℃，梯度设置见表1。

质谱条件：采用电喷雾离子化源正离子模式（ESI+）多反应监测模式（MRM）进行质谱扫描。离子化源温度550℃，喷雾电压5000V，气帘气20psi，雾化气为60psi，辅助加热气为60psi，碰撞气8，EP 7.5V，CXP 0V。各化合物离子对参数见表2。

表2 MNs、3-MT及内标MRM离子对参数

结果与讨论

MN、NMN和3-MT的提取离子图见图1，保留时间、线性范围、回归方程（权重1/x）、精密度（以RSD%计）和准确度（以回收率%计）见表3。

从表中可见，回归方程r2均大于0.996（即r大于0.998），精密度（RSD%）均小于10%，回收率在91.7%-106.3%之间。

图1 MN、NMN和3-MT LLOQ提取离子图

从上到下依次为MN、NMN和3-MT

总结

本方法使用安益谱全自主研发生产的TQ 9100三重四极杆串联质谱系统，实现了血浆中变肾上腺素类物质和3-甲氧酪胺的同时检测，该方法线性好、准确度高、重复性好。

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