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三重四极杆液相色谱质谱联用仪-使用Anyeep TQ9100测定人血浆中15种胆汁酸的含量


本文利用安益谱公司 Anyeep TQ9100超高效液相色谱串联质谱系统,建立了一种同时检测人血浆中15种胆汁酸含量的方法。该方法线性良好,定量限满足相关标准要求。利用本方法和设备可实现对胆汁酸的检测和定量。

三重四极杆液相色谱质谱联用仪-使用Anyeep TQ9100测定人血浆中15种胆汁酸的含量(图1)

胆汁酸是胆汁的主要功能成分,参与肝肠循环,其含量是衡量肝胆功能正常与否的重要标志物。目前,胆汁酸检测的主要应用场景为妊娠期肝内胆汁酸淤积症(Intrahepatic Cholestasis of Pregnancy, ICP)的筛查。

目前临床上针对15种胆汁酸主要使用 LC-MS/MS 法进行分析测定,该方法简便、灵敏,特异性好。因此,本方法采用 Anyeep TQ9100液相色谱串联质谱系统,测定人血清中胆酸(CA)、甘氨胆酸(GCA)、牛磺胆酸(TCA)、脱氧胆酸(DCA)、甘氨脱氧胆酸(GDCA)、牛磺脱氧胆酸(TDCA)、鹅脱氧胆酸(CDCA)、甘氨鹅脱氧胆酸(GCDCA)、牛磺鹅脱氧胆酸(TCDCA)、熊脱氧胆酸(UDCA)、甘氨熊脱氧胆酸(GUDCA)、牛磺熊脱氧胆酸(TUDCA)、石胆酸(LCA)、甘氨石胆酸(GLCA)、牛石氧胆酸(TLCA)。

仪器与试剂

Anyeep TQ9100超高效液相色谱串联质谱系统

乙腈(质谱纯,美国 Thermo Fisher 公司)

水(超纯水)

甲酸(德国默克公司)

液相条件

流动相A:0.1%甲酸,水

流动相B:乙腈

色谱柱:Agilent Poroshell 120 EC C18 column 2.1mm×100mm 1.9 μm

柱温:40 ℃

流速:0.25 mL/min

进样量:5 μL

质谱条件

离子化源: 电喷雾离子化源(ESI﹣)

源温度: 550 ℃

喷雾电压: 2500 V

气帘气: 10 psi

雾化气: 50 psi

辅助气: 55 psi

碰撞气: 8

扫描模式: MRM

三重四极杆液相色谱质谱联用仪-使用Anyeep TQ9100测定人血浆中15种胆汁酸的含量(图2)

样本处理

取待测样本100 μL,加入20 μL内标,380 μL乙腈,涡旋混匀并离心(4 ℃,15000 rpm,5 min);取上清液400 μL于96孔板中,40 ℃氮吹至干;加入100 μL复溶液(50%乙腈),置于微孔板震荡仪上1200 rpm/min 震摇5 min,4000 rpm 离心5 min,5 μL进样。

图谱

三重四极杆液相色谱质谱联用仪-使用Anyeep TQ9100测定人血浆中15种胆汁酸的含量(图3)

总结

本方法使用安益谱全自主研发生产的 TQ 9100三重四极杆串联质谱系统,实现了血浆中15种胆汁酸的同时检测,该方法线性好、准确度高、特异性强,每个样本分析仅需6分钟,具有较高的通量,适合临床检测分析。