三重四极杆液质联用仪-使用ANYEEP TQ9100 液相色谱串联质谱系统测定人血浆中15种胆汁酸含量
一、实验原理
利用乙腈沉淀血浆蛋白提取 15 种胆汁酸（含游离型与结合型），经 C18 色谱柱分离后，通过 ANYEEP TQ9100 的电喷雾负离子源（ESI⁻）电离，以多反应监测（MRM）模式定量分析。该仪器的 180° 碰撞反应池可有效去除基质干扰，确保检测特异性。
二、仪器与试剂
- 仪器
- Agilent Poroshell 120 EC C18 色谱柱
- 高速冷冻离心机、氮吹仪、微孔板震荡仪
- 试剂
- 15 种胆汁酸标准品：CA、GCA、TCA、DCA、GDCA、TDCA、CDCA、GCDCA、TCDCA、UDCA、GUDCA、TUDCA、LCA、GLCA、TLCA（纯度≥98%）
- 内标：CA-d4（氘代胆酸，纯度≥99%）
- 乙腈、甲醇（色谱纯），甲酸（质谱纯），超纯水（18.2MΩ・cm）
三、实验步骤
（一）样品前处理
- 取 100μL 血浆样本至离心管，加入 20μL 内标溶液（1μg/mL）
- 加入 380μL 乙腈，涡旋 30s，4℃、15000rpm 离心 5min
- 取 400μL 上清至 96 孔板，40℃氮吹至干
- 加 100μL 复溶液（50% 乙腈），1200rpm 震荡 5min，4000rpm 离心 5min，取 5μL 进样
（二）色谱条件
表 1 梯度洗脱程序
（三）质谱条件
- 离子源
- 气体参数
- 扫描模式
四、方法验证
- 线性范围：各胆汁酸在 0.01-10μmol/L 范围内线性良好（r²≥0.995），权重 1/x² 校正
- 精密度：低 / 高浓度样品 RSD＜10%（n=6）
- 准确度：加标回收率 92.2%-106.9%
- 检出限：0.003-0.01μmol/L（S/N=3）
五、结果与讨论
- 该方法 6 分钟完成单样本分析，适配临床高通量检测需求（如 ICP 筛查）
- ANYEEP TQ9100 的抗污染离子源设计降低了血浆基质干扰，结合内标法提高定量准确性
- 检测结果可辅助诊断肝炎、胆汁淤积等肝胆疾病，高危值（＞100μmol/L）需紧急干预
