基于安益谱 TQ8100 三重四极杆气质联用仪的短链脂肪酸测定方法
一、方法原理
短链脂肪酸（SCFAs，通常指 C2-C6 脂肪酸，如乙酸、丙酸、丁酸等）极性强、挥发性差异大，直接进样易出现峰形拖尾与吸附损失。本方法采用硫酸 - 甲醇酯化衍生法，将羧基转化为极性更低的甲酯衍生物，通过安益谱 TQ8100 的气相色谱实现高效分离，再经电子轰击电离源（EI）电离，以三重四极杆特有的多反应监测（MRM）模式捕获特征离子对，结合内标法定量。该原理可有效排除生物基质（如粪便、血清）或食品基质中的干扰组分，定性准确率与定量精密度优于传统单四极杆气质联用仪。
二、仪器与试剂
（一）主要仪器
- 高速冷冻离心机；
- 涡旋振荡器；
- 恒温水浴锅；
- 分析天平；
- 具塞离心管；
- 容量瓶；
- 0.22μm 有机系微孔滤膜。
（二）主要试剂
- 甲醇（色谱纯）、乙醚（色谱纯）、正己烷（色谱纯）；
- 浓硫酸（分析纯，质量分数 98%）；
- 无水硫酸钠（分析纯，550℃灼烧 4h，密封保存）；
- 短链脂肪酸标准品（乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸，纯度均≥99%）；
- 内标物（乙酸 - d4、丁酸 - d7，纯度≥98%，用于校正衍生效率与基质效应）；
- 饱和氯化钠溶液（分析纯试剂配制，煮沸冷却后使用）；
- 氢氧化钠（分析纯），用于调节样品 pH。
三、实验步骤
（一）样品前处理（以粪便样品为例，其他基质可适配调整）
（二）仪器条件设置
（三）标准曲线绘制
（四）样品测定
四、方法验证
（一）线性关系
（二）检测限与定量限
（三）精密度
（四）准确度
五、注意事项
- 衍生化控制：浓硫酸需缓慢滴加并混匀，避免局部过热导致样品碳化；衍生温度与时间需严格控制，确保反应完全（可通过加标回收验证衍生效率）。
- 仪器维护：安益谱 TQ8100 的进样口隔垫每 50 针更换 1 次，色谱柱每使用 100 针后需在 220℃老化 30min，每月用全氟三丁胺（PFTBA）校准质量轴，保证检测灵敏度。
- 基质干扰排除：食品或生物样品中高含量蛋白质、脂肪会影响萃取效率，可增加蛋白沉淀步骤（如加入乙腈）或采用固相萃取柱（如 HLB 柱）净化。
- 试剂与样品保存：衍生试剂需现配现用，标准品避免反复冻融；样品采集后需立即冷冻（-80℃），分析前解冻并快速处理，防止 SCFAs 降解。
- 安全防护：实验中涉及浓硫酸与有机溶剂，需在通风橱内操作，佩戴耐酸手套与护目镜，避免皮肤直接接触。
