安益谱 TQ9100液相色谱串联质谱系统在检测人血浆中变肾上腺素类物质和3-甲氧酪胺含量中的应用
在临床诊断和研究中，准确检测人体血液中的生物标志物对于疾病的早期诊断和治疗监测至关重要。变肾上腺素类物质（Metanephrines, MNs）和3-甲氧酪胺（3-Methoxytyramine, 3-MT）作为重要的神经递质和激素代谢产物，其在血液中的含量检测对于嗜铬细胞瘤和副神经节瘤的诊断具有重要意义。传统检测方法如高效液相色谱（HPLC）和免疫法存在灵敏度和特异性不足的问题。本文介绍了一种基于ANYEEP TQ9100液相色谱串联质谱系统的新方法，用于同时检测人血浆中的甲氧基肾上腺素（Metanephrine, MN）、甲氧基去甲肾上腺素（Normetanephrines, NMN）和3-甲氧酪胺（3-MT），并验证了该方法的准确性和可靠性。
一、引言
儿茶酚胺（Catecholamine, CA）是人体重要的神经递质和激素，其在嗜铬细胞内的儿茶酚-O-甲基转移酶（Catechol-O-methyltransferase, COMT）的催化作用下代谢成变肾上腺素类物质（Metanephrines, MNs）。MNs包括甲氧基肾上腺素（Metanephrine, MN）和甲氧基去甲肾上腺素（Normetanephrines, NMN）。由于MNs较CA的半衰期长，性质稳定且能直接反映嗜铬细胞的状态，因此临床上通过检测血液中MNs的含量来辅助诊断嗜铬细胞瘤和副神经节瘤。这些检测方法是《嗜铬细胞瘤和副神经节瘤诊断治疗专家共识（2020版）》和《中国继发性高血压临床筛查多学科专家共识（2023）》等专家共识推荐的首选标志物。
目前，MNs的分析方法主要包括HPLC法和免疫法，但这些方法存在灵敏度较低或特异性较差的问题。为了克服这些局限性，本研究采用ANYEEP TQ9100液相色谱串联质谱系统，同时检测人血浆中的MN、NMN和3-MT，以提供一种更高效、更准确的检测方法。
二、实验部分
（一）样品处理
取待测样本500μL于1.5mL EP管中，加入内标溶液20μL，涡旋混匀（2500 rpm，30s）。使用WCX填料的96孔固相萃取板，先用200μL水活化，待水流干后，加入上述样本，通过正压萃取装置进行固相萃取。待样本流干后，先后加入500μL水和500μL乙腈淋洗样本。待淋洗液流干后，加100μL乙腈（含2%FA）洗脱样本。洗脱液在25℃下用氮气吹干10分钟，用100μL复溶液（50%乙腈，含0.1%甲酸）复溶。最后，取20μL进样。
（二）色谱条件
色谱柱使用Phenomenex Kinetex F5 Column 3.0mm×100mm 2.6μm进行液相分离。流动相A为水（含0.1%甲酸），流动相B为乙腈，柱温40℃。梯度洗脱条件如表1所示：
表1 梯度洗脱条件
| 时间 (min) | 流速 (mL/min) | A相 (%) | B相 (%) |
|---|---|---|---|
| 0 | 0.25 | 95 | 5 |
| 1.5 | 0.25 | 95 | 5 |
| 2.8 | 0.25 | 90 | 10 |
| 2.9 | 0.25 | 5 | 95 |
| 3.4 | 0.25 | 5 | 95 |
| 3.5 | 0.25 | 95 | 5 |
| 6.0 | 0.25 | 95 | 5 |
（三）质谱条件
采用电喷雾离子化源正离子模式（ESI+）多反应监测模式（MRM）进行质谱扫描。离子化源温度550℃，喷雾电压5000V，气帘气20psi，雾化气60psi，辅助加热气60psi，碰撞气8，EP 7.5V，CXP 0V。各化合物离子对参数如表2所示：
表2 MNs、3-MT及内标MRM离子对参数
| 待测物名称 | Q1离子 | Q3离子 | 驻留时间 (ms) | CE (V) | DP (V) |
|---|---|---|---|---|---|
| MN* | 180.1 | 148.1 | 20 | 12 | 110 |
| MN | 180.1 | 120.1 | 20 | 12 | 110 |
| MN-d3 | 183.1 | 151.1 | 20 | 12 | 110 |
| NMN* | 166.1 | 134.1 | 20 | 10 | 50 |
| NMN | 166.1 | 121.1 | 20 | 10 | 50 |
| NMN-d3 | 169.1 | 137.1 | 20 | 10 | 50 |
| 3-MT* | 151.1 | 91.1 | 20 | 17 | 120 |
| 3-MT | 151.1 | 119.1 | 20 | 15 | 120 |
| 3-MT-d4 | 155.1 | 95.1 | 20 | 15 | 105 |
注： 为定量离子对
总结
本研究采用ANYEEP TQ9100液相色谱串联质谱系统，成功实现了人血浆中变肾上腺素类物质（MN、NMN）和3-甲氧酪胺（3-MT）的同时检测。该方法线性好、准确度高、重复性好，能够为嗜铬细胞瘤和副神经节瘤的临床诊断提供可靠的检测手段。ANYEEP TQ9100系统的高效检测能力和稳定的性能，使其成为生物标志物检测领域的有力工具，为相关疾病的早期诊断和治疗监测提供了重要的技术支持。
