三重四极杆液相色谱质谱联用仪-TQ9100液相色谱串联质谱系统在人血清中激素检测中的应用

技术博客 | 2025-08-14 | 阅读

摘要

本文利用ANYEEP TQ9100液相色谱串联质谱系统，对人血清中的睾酮、雄烯二酮、孕酮和17α-羟孕酮等激素进行了检测。通过优化样品处理和色谱质谱条件，实现了对这些激素的高效、准确分析。实验结果表明，该方法具有良好的线性关系、较高的准确度和精密度，适合临床应用。

关键词

TQ9100液相色谱串联质谱系统；人血清；睾酮；雄烯二酮；孕酮；17α-羟孕酮

三重四极杆液相色谱质谱联用仪-TQ9100液相色谱串联质谱系统在人血清中激素检测中的应用(图1)

安益谱TQ9100三重四极杆液相色谱质谱联用仪

一、引言

多囊卵巢综合征（PCOS）是一种常见的内分泌代谢性疾病，其核心病理生理问题是高雄激素血症。检测患者体内雄激素水平对于PCOS的诊断和治疗具有重要意义。目前，液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）技术因其高灵敏度和高选择性，已成为激素检测的重要手段。本文利用ANYEEP TQ9100液相色谱串联质谱系统，对人血清中的睾酮、雄烯二酮、孕酮和17α-羟孕酮等激素进行了检测，旨在为临床诊断提供技术支持。

二、实验部分

（一）样品处理

取200μL待测血清样本于1.5mL EP管中，加入20μL内标溶液，再加入980μL甲基叔丁基醚。涡旋混匀（2500rpm，10min）后离心（4℃，14000rpm，10min）。取上清液800μL于96孔板中，45℃氮吹至干。在吹干的96孔板中加入160μL复溶液（50%甲醇），置于微孔板震荡仪上2000rpm/min震摇2min，4000rpm离心5min，取5μL进样。

（二）色谱条件

色谱柱：Waters BEH C18（2.1mm×50mm，1.7μm）；
流动相A：水（含0.2mM氟化铵）；
流动相B：甲醇（含0.2mM氟化铵）；
柱温：40℃；
流速：0.4mL/min；梯度洗脱条件见表1。
表1 梯度洗脱条件
时间
流速
A相
B相
min
mL/min
%
%
0
0.4
85
15
1.0
0.4
40
60
3.0
0.4
5
95
4.0
0.4
5
95
4.1
0.4
85
15
5.5
0.4
85
15

（三）质谱条件

离子化模式：电喷雾离子化源正离子模式（ESI+）；
扫描模式：多反应监测（MRM）；
离子化源温度：500℃；
喷雾电压：5000V；
气帘气：20psi；
雾化气：50psi；
辅助加热气：50psi；
碰撞气：8；
EP：7.5V；
CXP：0V；各化合物离子对参数见表2。
表2 待测物及内标MRM离子对参数
待测物名称
Q1离子
Q3离子
驻留时间 ms
CE (V)
DP (V)
雄烯二酮*
287.2
97.0
25
12
100
雄烯二酮
287.2
109.0
25
15
100
睾酮*
289.2
97.0
25
12
100
睾酮
289.2
109.0
25
15
100
17α-羟孕酮*
331.2
97.0
25
12
100
17α-羟孕酮
331.2
109.0
25
15
100
黄体酮*
315.2
97.0
25
12
100
黄体酮
315.2
109.0
25
15
100
雄烯二酮-d7*
361
100.0
25
12
100
雄烯二酮-d7
294.2
331.2
25
15
100
睾酮-d3*
294.2
97.0
25
16
100
睾酮-d3
292.2
113.0
25
12
100
17α-羟孕酮-d8*
292.2
100.0
25
12
100
17α-羟孕酮-d8
339.2
109.0
25
16
100
黄体酮-d9*
339.2
100.0
25
12
100
黄体酮-d9
324.1
109.0
25
16
100
*为定量离子对

三、结果与讨论

（一）色谱和质谱条件优化

通过优化色谱条件，实现了对睾酮、雄烯二酮、孕酮和17α-羟孕酮的良好分离。质谱条件的优化则确保了各化合物的高灵敏度检测。实验结果表明，该方法能够有效检测人血清中的目标激素。

（二）线性关系、精密度和准确度

实验测定了4种激素的线性范围、回归方程、精密度和准确度。结果表明，各激素的线性关系良好，相关系数均大于0.998。低、中、高浓度的精密度（RSD%）均小于10%，回收率在92.2%~105.4%之间。具体结果见表3。

三重四极杆液相色谱质谱联用仪-TQ9100液相色谱串联质谱系统在人血清中激素检测中的应用(图2)

三重四极杆液相色谱质谱联用仪-TQ9100液相色谱串联质谱系统在人血清中激素检测中的应用(图3)

（三）提取离子图

实验得到了4种激素的提取离子图，保留时间、线性范围、回归方程、精密度和准确度结果见表3。图1展示了4种激素基质加标的最低检测限（LLOQ）提取离子图。

图1 4种激素基质加标LLOQ提取离子图

三重四极杆液相色谱质谱联用仪-TQ9100液相色谱串联质谱系统在人血清中激素检测中的应用(图4)

三重四极杆液相色谱质谱联用仪-TQ9100液相色谱串联质谱系统在人血清中激素检测中的应用(图5)

三重四极杆液相色谱质谱联用仪-TQ9100液相色谱串联质谱系统在人血清中激素检测中的应用(图6)

三重四极杆液相色谱质谱联用仪-TQ9100液相色谱串联质谱系统在人血清中激素检测中的应用(图7)

从上到下依次为雄烯二酮、睾酮、17α羟孕酮和孕酮

四、结论

本文利用ANYEEP TQ9100液相色谱串联质谱系统，成功实现了对人血清中睾酮、雄烯二酮、孕酮和17α-羟孕酮的检测。该方法具有良好的线性关系、较高的准确度和精密度，前处理简单，单个样本分析时间为5.5分钟，适合临床应用。未来，该方法可进一步应用于其他激素的检测，为临床诊断和治疗提供有力支持。

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