使用Anyeep TQ9120超高效液相色谱串联质谱系统测定动物性食品中10种利尿药的方法
摘要：
本文利用安益谱公司Anyeep TQ9120超高效液相色谱串联质谱系统，建立了一种检测多种动物性食品中10种利尿药含量的方法。该方法线性良好，检测限定量限满足相关标准要求。利用本方法和设备可实现对动物源性食品中10种利尿药的检出和定量。
引言
人体长期摄入低剂量的利尿药，可能导致电解质紊乱、血压异常波动、糖代谢和脂代谢紊乱。但利尿药的使用更严重的危害是掩盖其他违禁药物的使用，如瘦肉精、激素、抗生素等，使其在常规检测中难以被检出。中国及欧盟、美国等的食品安全法规均将利尿药列为食用动物禁用的药物。例如，《食品中可能违法添加的非食用物质名单》和《兽药残留限量标准》中明确规定其不得检出。本文依据《GB 31658.25-2022 食品安全国家标准动物性食品中10种利尿药残留量的测定液相色谱-串联质谱法》的要求，开发了同时检测多种动物性食物中10种利尿药的方法，采用内标法定量。
仪器与试剂
Anyeep TQ9120超高效液相色谱串联质谱系统
乙腈，甲醇(质谱纯，美国Thermo Fisher公司)
乙酸铵(分析纯，德国Merck公司)
正己烷(色谱纯，上海安谱)
标准品及内标(上海安谱)
HLB固相萃取小柱(上海安谱，SBEQ-CA6685)
液相条件
流动相A: 5 mM乙酸铵，水
流动相B: 乙腈
色 谱 柱: Waters Acquity UPLC BEH C18,1.7um, 2.1×100 mm
柱 温: 35 °C
流 速: 0.3 mL/min
进 样 量: 5 μL
质谱条件
离子化源:
离子化源: 电喷雾离子化源(ESI)
源 温 度: 550 ℃
喷雾电压: ±5500 V
气 帘 气: 30 psi
雾 化 气: 30 psi
辅 助 气: 65 psi
碰 撞 气: 11
扫描模式: MRM
样品处理
基质匹配标准工作曲线：用50%乙腈水配置标准品至下述浓度：中氯噻嗪、氢氯噻嗪、卞氟噻嗪和坎利酮的浓度依次为0.10 ng/mL、0.20 ng/mL、0.50 ng/mL、1.00 ng/mL、2.00 ng/mL、5.00 ng/mL、10.0 ng/mL、20.0 ng/mL、50.0 ng/mL；氯噻酮、乙酰唑胺、呋塞米、螺内酯、4-氨基-6-氯苯-1,3-二磺酰胺、氨苯蝶啶的浓度依次为0.50 ng/mL、1.00 ng/mL、2.50 ng/mL、5.00 ng/mL、10.0 ng/mL、25.0 ng/mL、50.0 ng/mL、100.0 ng/mL、250.0 ng/mL，各工作液中内标溶液的浓度为20.0 ng/mL。现用现配。
样品处理：准确称取均质后试样2 g（精确至0.01g）于50 mL塑料离心管中，添加1 μg/mL利尿剂混合内标工作液40 μL，加入8.0 mL 90%乙腈溶液（对于猪、牛、羊、禽类食品）或乙腈溶液（对于蛋、奶类食品），于旋涡振荡器上剧烈振荡2 min，超声15 min，4 ℃、8000 rpm离心5 min。加入5 mL正已烷溶液（乙腈饱和），低速涡旋10 s，4℃、8000 rpm离心3 min，取下层清液，用乙腈稀释至20 mL。取上述提取液10 mL过HLB固相萃取柱，以不大于1 mL/min的速率通过固相萃取柱，用带有刻度的试管准确接收流出的样液，并用1 mL的90%乙腈-甲醇溶液淋洗过柱，接收全部液体。洗脱液于40 ℃氮气吹至近干。加入1 mL乙腈-水（1:1，v/v）溶液溶解残渣，过0.22 μm微孔滤膜，待测。
回收率样品处理：准确称取匀质后试样2.0 g（精确至0.01g）于50 mL塑料离心管中，添加1 μg/mL利尿剂混合内标工作液40 μL以及不同体积（如1 μl，2 μl，4 μl，20 μl，80 μl）1 μg/mL标准品（以坎利酮计）混合标准品溶液，配置成LOQ、低、中、高等多个不同浓度的回收率样品，并按照“样品处理”所述方法进行样品处理。
线性范围
精密度和准确度/回收率（鸡蛋基质）
图谱
总结
本文建立了Anyeep TQ9120超高效液相色谱串联质谱系统分析动物性食品中10种利尿药的方法。从结果可见，该方法具备优异的灵敏度、稳定性和线性范围，相关指标符合标准要求，可用于动物性食品中利尿药的常规分析检测。